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7Sea-Tissue Direct PCR 试剂盒

Q:这种直接PCR试剂盒,扩增产物可以做哪些实验

A:PCR的产物可以通过琼脂糖凝胶电泳和EB染色进行分析,进行下游的常规操作,例如限制性酶切、DNA测序、dHPLC分析等


Q:可以应用于哪些领域

A:1、人类、其他哺乳动物和鸟类基因分析;

   2、可用于常规检测:限制性酶切、琼脂糖凝胶电泳/EB染色、荧光毛细管电泳、DNA测序或dHPLC分析


Q:适用样品

A:新鲜或冻存的组织、细胞、病毒等样品(保存良好的石蜡包埋样品)


Q:样品准备

A:1、组织或细胞一般不需要处理,取103-105左右的样品直接PCR;

   2、石蜡包埋的样品,建议加入5-10倍体积的预处理液中,55℃孵育过夜后,煮沸2-5min,取1-2.5ul样品进行PCR(2-5%总反应体积);剩余样品保存在-20℃


Q:反应体系

A:以20ul体系示例(20-50ul/reaction),在微量离心管中加入以下各种成分

样品裂解液 1-2ul
聚合酶 0.5-1ul
5*PCR Buffer 4ul
dNTP(10mM) 0.4ul
Primers 1-2ul(0.25-1uM终浓度)
ddH2O UP to 20ul

Q:PCR反应参数设置

A:依据扩增产物而定,以2kb的扩增产物为例:94℃ 4 min,35 cycles(94℃ 30 sec,55℃ 30 sec,72℃ 1 min),72℃ 5 min,4℃保温。


Q:我的片段大小<1kb

A:扩增1kb以下片段,30 sec延伸即可;也可采用两步扩增法(设计引物长度22-25bp,68℃退火延伸)

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