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7Sea-Soil Direct PCR试剂盒

Q:模板制备需要多久

A:无需DNA提取,样品处理快捷,可在5-20min内完成模板制备


Q:这种直接PCR试剂盒,扩增产物可以做哪些实验

A:PCR的产物可以通过琼脂糖凝胶电泳和EB染色进行分析,进行下游的常规操作,例如限制性酶切、DNA测序、dHPLC分析等


Q:样品预处理

A:把土壤样品加入5-10倍左右体积的裂解液中,煮沸2-5min(或者75℃加热20min,每隔10min剧烈震荡一次,然后高速离心20min(12000g),小心取上清并移入样品管中,从制备好的上清中取1-2.5ul(2-5%总体反应体积)含有DNA的裂解液加入PCR反应体系作为模板,剩余样品可以在-20℃储存。


Q:反应体系

A:以40ul体系示例(20-50ul/reaction),在微量离心管中加入以下各种成分

土壤抽提液 1-2.5ul
聚合酶 1-2ul
5*PCR Buffer 8ul
dNTP(10mM) 0.8ul
Primers 1-2ul(0.25-1uM终浓度)
ddH2O UP to 40ul

Q:PCR反应参数设置

A:依据扩增产物而定,以2kb的扩增产物为例:94℃ 4 min,30 cycles(94℃ 30 sec,55℃ 30 sec,72℃ 1 min),72℃ 5 min,4℃保温。


Q:我的片段大小<1kb

A:扩增1kb以下片段,5sec延伸即可;也可采用两步扩增法(设计引物长度22-25bp,68℃退火延伸)

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