Q:贴壁细胞样品准备

A:吸弃细胞培养液，胰酶消化吹打细胞，制备单细胞悬液，1000g离心5分钟沉淀细胞后，用1ml预冷的PBS重悬。然后再一次1000g离心5分钟沉淀细胞。

Q:悬浮细胞样品准备

A:1000g离心5分钟沉淀细胞后，用1ml预冷的PBS重悬。然后再一次1000g离心5分钟沉淀细胞

Q:组织细胞样品准备

A:将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后，用0.25%的胰酶消化0.5-1个小时。经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000g离心5分钟沉淀细胞后，用1ml预冷的PBS重悬。然后再一次1000g离心5分钟沉淀细胞。

Q:细胞如何收集

A:我们推荐用6孔板或者6cm dish，收集细胞时全部收集，以防止实验误差

Q:细胞如何固定

A:细胞沉淀用1ml预冷的70%乙醇轻轻混匀，4℃固定2个小时以上或者过夜。接下来1000g离心5分钟沉淀细胞后，用1ml预冷的PBS重悬。然后再次1000g离心5分钟沉淀细胞。

Q:碘化丙啶染色液配置

A:1ml染色缓冲液中加入25ul碘化丙啶储液和20ul RNase A，混匀待用。

Q:每个细胞样品加入多少染色液

A:每个细胞样品加入0.5ml配置好的碘化丙啶染色液，轻轻混匀重悬细胞。

Q:孵育多长时间

A:37℃，避光温浴30分钟

Q:多长时间内上流式细胞仪检测

A:上流式细胞仪检测（5小时内完成为佳）。

Q:检测参数

A:激发波长为488nm，检测红色荧光。

Q:配置好的碘化丙啶染色液保存温度，最长可以保存多久

A:配置好的PI染色液4℃保存1个星期。-20℃保存1个月。避免反复冻融

Q:如何保存

A:在-20℃，避光条件下，保存1年以上。0-5℃，避光条件下，可以保存2个月。

Q:自备试剂

A:PBS；70%乙醇

Q:是否需要加细胞打孔的东西

A:说明书中标明需客户自备的70%乙醇，就有细胞打孔的作用。70%的乙醇具有固定和打孔的作用 无需再另外准备其他打孔的东西

Q:是否避光

A:碘化丙啶存在淬灭现象，保存和使用过程中注意避光

Q:通常进行细胞周期试验的时候药物都作用多久

A:细胞周期实验时，PI孵育细胞一段时间后，尽快流式检测。时间过长，会造成染色过度或者细胞破碎等情况，造成实验误差。

Q:在流式细胞仪检测成纤维细胞S期细胞比例的情况，是否可用周期试剂盒

A:可用，只要是能处理成单细胞悬液，都可以用周期试剂盒

Q:试剂盒本身有无红色？实验过程中染不上色原因？如何解决？

A:试剂盒中应该有红色的PI，也许是试剂盒中的PI已经失效，建议避光保存

Q:希望G0期和G1期能够分开看结果，检测中比重，如何做？

A:所有的PI染色周期试剂盒都不能区分G0和G1期。分不开  G0和G1期，染色体都是单倍，PI染色一样，无法区别。