Q:原理

A:通过和带负电荷的DNA非共价结合形成纳米聚合物，从而将DNA转染进入真核细胞。

Q:适用细胞

A:对贴壁细胞和悬浮细胞的瞬时转染或稳定转染均有效

Q:转染前24孔板内培养细胞，数量如何确定（细胞培养以24孔板为例，其他培养板或培养皿参考24孔板进行操作）

A:在转染前一天（20-24小时）把约20-50万细胞（具体的细胞数量据细胞大小和细胞生长速度而定）培养到24孔板内，使第二天细胞能达到约50-60%满。

Q:转染试剂推荐用量

A:预热培养基至室温，取25ul细胞培养液入一无菌离心管中（如OPTI-MEM、DMEM、RPMI1640等），加入1.5ul TransAid 2000转染试剂，轻轻摇匀。

Q:DNA用量

A:取25ul细胞培养液入另一无菌离心管中，再加入1ug DNA，混匀。

Q:TransAid 2000-DNA混合物

A:把以上转染试剂缓慢、逐滴加入以上DNA溶液中，用移液器上下抽吸或者Vortex混匀，室温静置20min。

Q:最佳复合物形成温度

A:在混合前，确保转染试剂盒DNA溶液都已混合均匀，推荐20-35℃为最佳复合物形成温度。

Q:基因表达

A:对于基因表达，再培养24-40小时候即可检测转染效果

Q:筛选稳定表达细胞株

A:如果用于筛选稳定表达细胞株，则在转染后24-40小时即可加入适当的筛选药物，例如G418等，进行稳定表达细胞株的筛选。

Q:是否需要更换培养液

A:转染后不更换细胞培养液对大多数细胞无明显毒性、不影响转染效率，但是隔夜更换培养液对一些细胞（如干细胞）可以提高转染效率。

Q:转染效果不够好，有无建议

A:在TransAid 2000的使用中，遇到转染效果不够好的问题时，如果参照以下的方法，会有意向不到的效果：

  1、Q:转染后细胞状态不好时

        A:a、提高细胞的丰度（80%-90%）；
           b、按比例减少DNA和TransAid 2000的用量（以24孔板为例，调整比例为0.5ug DNA：1ul TransAid 2000）；

  2、Q:某些难转染的细胞

        A:改变孵育方法，包括：
           a、改变孵育的程序：质粒和TransAid 2000共同加到一个管一起孵育20分钟（以24孔板为例，在100ul培养基里，先加入DNA，混匀后，直接加入TransAid 2000后充分混匀）；
           b、改变孵育温度：多数情况下，室温孵育就会有好结果，但是对于某些难转染的细胞，在37℃孵育，转染效率会提高30-50%。
           c、延长转染时间：一般24小时内，转染就会完成，但是有时蛋白表达不明显（例如示踪的GFP的表达），这时可以换新鲜的培养基，继续培养24小时，转染效果从蛋白表达上看，会非常明显。以Hela细胞为例，采用1ug DNA：2.5ul TransAid 2000，室温孵育20min，24小时换液，48小时候观察，75%以上的细胞为转染阳性。

Q:含血清或无血清的培养基是否可直接加入进行转染

A:须无血清培养基

Q:质粒DNA, DNA, siRNA是否均可转染？

A:均可转染

Q:转染条件优化

A:对于24孔板中一个孔的细胞，TransAid 2000的用量可以在1-5ul内进行适当调节，DNA用量可以在0.5-2ug的范围内进行适当调节。最佳的转染条件，因具体的细胞和培养条件而定，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。

Q:如若不是24孔板，试剂用量怎么定？

A:对于其他培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养面积按比例进行换算。详见下表

上表中给出的DNA和TransAid 2000的参数均是由pEGFP-N1转染293T、CH0、NIH-3T3、HeLa、HepG2以及COS-7得出的数值，若转染其他细胞系可对DNA和TransAid 2000的用量、细胞密度及转染时间等进行优化。对于难以转染的细胞，同时建议用TransAid2000 Plus代替TransAid 2000.

Q:TransAid 2000转染试剂是脂质体还是非脂质体

A:非脂质体