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快速裂解液(免抽提)

Q:七海快速提取裂解液M是否适用直接PCR?无需再抽提DNA?

A:7Sea-Lysis Buffer for Microorganism是为直接PCR(Direct PCR)专门研制的一种微生物裂解液,可快速抽提DNA,裂解液可直接作为反应模板,进行PCR扩增。


Q:适用样本

A:本裂解液能够快速裂解大部分细菌、真菌等微生物(包括革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、酵母菌、霉菌等)


Q:反应原理

A:释放微生物的基因组DNA,得到的微生物裂解液含有大量DNA,可以直接作为反应的模板,用于各种PCR反应。


Q:每次取量

A:取20-40ul Lysis Buffer for Microorganism加入灭菌的离心管中


Q:取样注意事项

A:用灭菌枪头或者牙签挑取单菌落,置于离心管中,搅动混匀,注意:
  ·固体培养菌落:应该多次搅动或者抽吸,尽量时菌落分散成单细胞状态,块状菌落会影响裂解效果;
  ·液体培养微生物:取5-10ul酵母或者细菌液体培养物(含基因组103-105),离心,完全吸除培养基,加入20-40ul预处理液,混合均匀


Q:裂解条件

A:离心管于95°热变形10分钟或者煮沸3分钟,然后低俗离心(6000rpm,1min)


Q:裂解后样品如何保存

A:保存在-20°


Q:PCR反应模板的量

A:取0.5-1ul裂解后的上清液作为PCR反应的模板
  ·通常取用5%(体积比)的上清作为模板,例如20ul PCR反应体系,取1ul裂解上清作为模板,不同菌体裂解效果会有差别,初次测试,建议分梯度测试,例如分别取0.5、1和2ul上清做PCR,电泳鉴定产物后,确定最佳上清体积。
  ·本产品和7Sea Direct PCR系列配合使用,可以达到最佳效果,7Sea Direct PCR为高保真、高反应性的Direct PCR,广泛用于血液和组织、微生物、植物、细胞等不同样品的直接PCR

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