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anti-FLAG Mab-sepharose

Q:Anti-FLAG Mab Sepharose作用

A:可以用于带FLAG标签的蛋白免疫沉淀、蛋白纯化等。


Q:抗体种类

A:单克隆抗体


Q:抗体亚型

A:IgG


Q:来源宿主

A:小鼠(mouse)


Q:免疫原

A:KLH 交联的多肽FLAG(DYKDDDDK)


Q:纯度

A:将腹水经硫酸铵分级沉淀纯化、亲和纯化,纯度>95%


Q:载量

A:1mg/mL


Q:产品形态

A:50%悬浊液,白色


Q:储存溶液

A:PBS,pH 7.4,50% 甘油,0.02% (w/v) 叠氮化钠


Q:应用于哪些实验

A:1、可用于带FLAG标签的蛋白免疫沉淀
     2、可用于带FLAG标签的重组蛋白大量纯化 


Q:如何裂解细胞

A:加入适量lysis buffer(含蛋白酶抑制剂),裂解细胞。
   建议:在lysis buffer 中,加入全能核酸酶 benzonase,降解DNA和RNA,可以简化实验、显著提高产物得率和实验的重复性。


Q:裂解液可以用什么溶液

A:lysis buffer


Q:大肠杆菌-裂解

A:每1L培养的菌液加入10mL裂解液(40mM Tris-HCl,pH8.0,1% CHAPSO),含蛋白酶抑制剂,离心取上清


Q:哺乳动物细胞-裂解

A:先用PBS润洗细胞2次。每个培养皿(约106~107个细胞)加入1mL裂解液(50mM Tris-HCl,150mM NaCl,1%Triton X-10 ,pH7.4),每毫升裂解液可加入10 µL蛋白酶抑制剂混合物,离心取上清


Q:细胞裂解后如何处理

A:用lysis buffer洗涤FLAG--亲和琼脂糖三次


Q:加入多少sepharose beads

A:加入样品量10%(V/V)左右的亲和琼脂糖


Q:加入sepharose后如孵育多久

A:4℃震荡混合,2hr或者过夜


Q:如何洗涤sepharose(用什么洗涤)

A:洗涤亲和琼脂糖三次


Q:如何洗脱蛋白

A:用FLAG肽(或者0.1M Gly,pH3)洗脱目标蛋白


Q:如何再生

A:用0.1M Gly,pH3,洗涤2-3次(快速洗涤,长时间会损坏抗体),再用PBS洗涤。


Q:是否可做纯化

A:适用蛋白纯化实验


Q:如果需大量蛋白纯化,如何实验

A:大量蛋白纯化,建议装1-5mL亲和柱,实验方法和一般亲和柱类似

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