Q:T4 DNA Ligase用途

A:常用于催化双链DNA平末端或互补粘性末端之间的连接反应，也能催化双链RNA 5’-磷酸末端和3’-羟基末端间的连接。还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。

Q:来源

A:重组蛋白质（E.coli）

Q:活力单位定义

A:1个Weiss活性单位是指在ATP-Ppi交换反应中，37℃、20分钟内将1nmol【32 PPi】转换为Norit可吸收形式所需的酶量。1个Weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位（CEU）
   1个粘性末端连接单位：20ul反应体系（50mM Tris-HCL PH7.5，10mM MgCL2，10mM DTT，1mM ATP，25ug/ml BSA，0.12uM（30ug/ml）的5’DNA末端）中，在16℃、30分钟内50%连接HindIII酶切的Lambda DNA产物所需要的酶量。

Q:纯度

A:＞95%，没有检测到其他蛋白酶和核酸酶活力。

Q:应用

A:DNA平端、粘端连接或者DNA环化。

Q:使用示例

A:以10ul连接体系示例，在微量离心管中加入以下各种成分
  

Q:关于Mg2+

A:T4 DNA连接酶要求Mg2+，因此螯合Mg2+的EDTA的存在会阻碍反应

Q:NaCL、KCL浓度

A:NaCL或KCL浓度大于200mM时强烈抑制T4 DNA Ligase

Q:T4 DNA连接酶失活

A:65℃孵育10min或70℃孵育5min可以导致T4 DNA连接酶失活

Q:可以通过何种方式增加连接效率

A:聚乙二醇（PEG）极大地增加平末端连接效率

Q:是否可以通过加入终浓度为5% PEG Solution来提高平末端的连接效率？

A:可以

Q:粘端连接和平端连接是否反应时间不同？

A:时间相同