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甲基化试剂盒

Q:反应原理

A:基因组DNA双链变性解链后,在亚硫酸盐的作用下序列中的C→U,CG→UG,而5-甲基胞嘧啶则不受影响,CG→CG。通过各种实验技术,如MSP(Methylation Specific PCR),BSP(bisulfate-sequencing PCR),HRM(High Resolution Melting),焦磷酸测序(Pyrosequencing)和甲基化芯片等技术,可检测出这种差异,从而确定基因组CpG岛甲基化状态。


Q:修饰时间是多久

A:本制品可将DNA变性的同时进行亚硫酸氢盐转化操作,整个操作过程的时间被缩短到3小时。


Q:可以转换多少DNA

A:试剂盒每次转换反应可以转换1ng-1ug的DNA


Q:推荐DNA量

A:为了达到最优的转换效果,最好是限制在0.2ug-0.8ug的范围,能将所有非甲基化胞嘧啶转换成尿嘧啶,推荐使用500ng的DNA。


Q:转换率

A:>99.9%


Q:MC1 MIX(M-Conversion Reagent)制备

A:试剂盒中所提供的MC1 MIX是固体混合物,并且一定要在首次使用前制备好。方法:添加900ul ddH2O或者去离子水,300ul的MC2 Buffer和100ul的MC3 Buffer到一管MC1中。在室温下颠倒混匀2分钟或在摇床上摇动溶解5分钟。


Q:MC1溶液的保存

A:在使用之前将MC1溶液在室温(20℃-30℃)下避光保存。每管的MC1是针对10次DNA处理设计的。为了得到较好的结果,MC1应当在制备后立即使用。如果不立刻使用的话,MC1溶液可以在-20℃存储1周。而且在使用之前存储的MC1溶液一定要在室温下解冻并且通过振荡或颠倒混匀2分钟。MC1对光很敏感,所以要尽量减少在光下的暴露。


Q:M-WASH BUFFER的制备

A:添加22ml(对于100次的应为44ml)95%或无水乙醇到M-WASH BUFFER中来制备最终可以使用的M-WASH BUFFER


Q:最佳修饰量

A:推荐最佳修饰量为400-800ng


Q:每次加入的MC1溶液量

A:PCR管中添加150ul的MC1(M-Conversion Reagent)到每20ul DNA样品中。


Q:DNA样品量不足20ul

A:如果DNA样品的体积小于20ul,则用水来弥补差量。


Q:样品管暂时不实验,是否可以保存

A:4℃下存储(最多20小时)。


Q:洗脱后的DNA如何保存

A:DNA可立刻进行分析或储存在低于-20℃下以备以后使用。


Q:PCR每次使用多少洗脱的DNA作为模板

A:我们建议您每次PCR(25ul体系)使用4ul洗脱的DNA作为模板。

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