Q:逆转录酶反应原理

A:莫洛尼氏鼠白血病毒逆转录酶（M-MLV RT）能以单链RNA或DNA为模板，在引物的引发下合成与模板互补的DNA链。

Q:来源

A:重组蛋白质（E.coli），通过基因重组技术克隆表达的缺失突变型Rnase H-的M-MLV反转录酶，Rnase H活性缺失，延伸能力强，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建等

Q:活力单位定义

A:以Poly（A）为模板，Oligo（dT）为引物，，在37℃条件下，10min内催化掺入1nmol dTTP所需酶量定义为1个活性单位（U）

Q:应用

A:用于1st-Strand cDNA的合成，RT-PCT反应以及Real Time RT-PCR反应等。

Q:模板RNA/引物混合液的配置

A:

Q:混合液配置后处理

A:65℃保温5min后迅速在冰上冷却2min

Q:反应体系

A:

Q:反应温度和反应时间

A:42℃孵育1小时；
   以Random Primers作为反转录引物时应先于25℃，反应10min，然后再于42℃条件孵育1小时。

Q:终止反应

A:70℃加热15min终止反应。

Q:终产物

A:cDNA溶液可直接用于2nd-Strand cDNA的合成或PCR扩增。

Q:Rnase H—缺失与普通MMLV的区别

A:H型缺失的可用于较长cDNA合成及高比例的全长cDNA文库构建