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KOD高保真酶

Q:保真性

A:保真性能比普通Taq聚合酶高80倍


Q:延伸速率

A:在推荐的条件下大于每分钟2kb


Q:活性定义

A:嗜热菌DNA Polymerase的活性单位定义为:在推荐的缓冲反应体系中,以大马哈鱼精DNA为模板,68° 30分钟内合成10nmol核酸所需要的酶量为1活性单位


Q:质量控制

A:经酶切实验检测无外源核酸酶污染,PCR方法未检测到宿主DNA残留,-20°存放一年,无明显活性丧失。


Q:贮存溶液

A:50mM Tris-HCL(PH 7.6),50mM KCL,1mM DTT,0.1mM EDTA,50%(v/v) glycerol


Q:dNTP注意事项

A:对于高保真酶,dNTP中杂质强烈抑制聚合酶反应,请使用高质量的dNTP


Q:引物长度

A:引物的适当长度为20-35bp;过长或者过短,需要优化退火温度;


Q:GC含量高

A:GC含量高的情况下,请使用GC buffer,对保真性没有影响;扩增基因组或GC含量较高时,建议98°变性


Q:可参考PCR体系

A:

KOD 0.5-1ul
2xKOD buffer 10ul
dNTP(10mM each) 0.5ul
Primers(10uM) 1ul(各0.5ul)
无菌H2O Up to 20ul

Q:可参考PCR程序(根据实际反应条件摸索优化)

A:

95℃或98℃  4min 1Cycle
95℃或98℃  20s 普通质粒扩增(28 Cycles)
质粒点突变(20 Cycles)
cDNA模板扩增(28-35 Cycles)
末端补平(5 Cycles)
52°(Tm-5℃)  20s
68℃  1.5kb/min
68℃  3min (1 Cycle)


Q:组分中是否含有Mg2+

A:buffer中含mg离子


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