Q:这种直接PCR试剂盒，扩增产物可以做哪些实验

A:PCR的产物可以通过琼脂糖凝胶电泳和EB染色进行分析，进行下游的常规操作，例如限制性酶切、DNA测序、dHPLC分析等

Q:适用哪些样本

A:嫩叶片组织、植物叶片、种子等

Q:样品处理需要多久

A:10min内完成模板制备

Q:操作流程、实验步骤等与常规检测方法有多少区别

A:除了无需进行DNA抽提，其他手段兼容。

Q:样品如何处理

A:用枪头戳取少量嫩叶片直接PCR，或者把微量的样品（例如剪切成3mm的叶片）加入40ul裂解液A中，75℃煮10min，再添加40ul裂解液B混匀。取1-2.5ul（2-5%总反应体积）含有植物DNA的裂解液加入PCR反应体系作为模板

Q:样品处理后如何保存

A:可-20°储存

Q:反应体系

A:以40ul体系示例（20-50ul/reaction），在微量离心管中加入以下各种成分

Q:我的样本是嫩叶片如何预处理

A:对于新鲜嫩叶片（例如拟南芥或者多数双子叶植物的新鲜嫩叶片），可以不需预处理，用枪头戳取嫩叶片直接加入PCR反应体系反应

Q:我的样品较难处理，DNA不易抽提

A:部分难处理样品，可以加入裂解液后碾磨，再煮沸处理

Q:我的样品为新鲜的植物汁液，是否需要预处理

A:豆浆、植物果汁或者新鲜植物汁液可以直接PCR

Q:PCR反应模板

A:需要足够的模板（100个以上拷贝）

Q:裂解液使用量是否有要求

A:聚合酶可以耐受最高10%（V/V）的裂解液，过量裂解液会对PCR反应产生抑制并对下游产物分析产生不利影响，大多数情况加入2-5%（V/V）植物裂解液可以完成PCR反应

Q:如何确认加入模板的最佳范围

A:初次实验，建议加入1%、2.5%和5%（V/V）植物裂解液或者植物汁液

Q:dNTP不稳定

A:dNTP容易失效，反应为阴性时，建议增加dNTP用量，或者更换新鲜制备的dNTP

Q:PCR反应参数设置

A:依据扩增产物而定，以2kb的扩增产物为例：94℃  4min，35 cycles（94℃ 30 sec，55℃ 30 sec，72℃ 1 min），72℃ 5 min，4℃ soak。

Q:片段大小＜1kb

A:扩增1kb以下片段，30 sec延伸即可；可用两步扩增法（引物长度22-25bp，68℃退火延伸）