Q:作用
A:UNG酶可选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键,对RNA无活性,主要应用于PCR扩增产物的防污染。
Q:酶活性单位定义
A:在20mM Tris-HCL(PH8.0),1mM DTT,1mM EDTA反应液中,37°-50度条件下反应1小时,能够降解1nmol含尿嘧啶的DNA所需的酶量定义为一个活性单位。
Q:活性测试
A:在含dUTP不含dUTP的PCR产物中,加入或不加UNG酶,50°反应2分钟,94°2分钟灭活UNG酶,电泳检测条带。
结果显示,在含dUTP的PCR产物中加UNG酶,50°反应2分钟后,DNA被完全降解;在不含dUTP的PCR产物中加UNG酶,电泳谱带不发生变化。
Q:酶储存缓冲液配置
A:
20mM |
Tris-HCL(PH7.5) |
50mM |
NaCL |
1mM |
DTT |
1mM |
EDTA |
50%(v/v) |
Glycerin |
Q:推荐实验
A:本酶可作用于普通PCR反应液和RT-PCR反应液
Q:PCR反应体系配置实例
A:
反应液组分 |
加量 |
5xPCR Buffer |
5ul |
dU plus dNTP Mix |
1ul |
Primer1(10uM) |
0.5ul |
Primer2(10uM) |
0.5ul |
Taq(5U/ul) |
0.2ul |
UNG(1U/ul) |
0.2ul |
模板 |
1ul |
蒸馏水 |
up to 25ul |
Q:反应条件
A:50°反应2分钟,94°处理2分钟,随后做PCR扩增
Q:反应温度、时间;失活温度、时间;是不是95°变性?55°是否可以失活?反应多久?
A:50°反应2分钟,94度2分钟失活。55度也可以失活,反应5min
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