Q:基质

A:4%交联琼脂糖凝胶

Q:配基

A:重组Protein A

Q:配基密度

A:6mg重组蛋白A/ml

Q:动态吸附载量

A:60mg 人IgG/ml

Q:颗粒大小

A:50-160um

Q:推荐流速

A:50-300cm/h

Q:PH范围

A:2--13

Q:使用温度

A:4°或者常温

Q:Protein A Sepharose层析操作步骤

A:装柱、平衡、上样、洗涤、洗脱、再生

Q:如何平衡

A:用5-10柱体积的平衡缓冲液（20mM PBS，PH7.4）平衡层析柱，至流出液电导和PH与平衡液一致。

Q:某些载量较少抗体如何纯化

A:可以适当调高平衡缓冲液中的盐浓度（最高达3M）和PH值（最高达8.2），来增强抗体与介质的吸附结合力。但有时过高的PH值会增加杂蛋白的吸附，因此应用时需根据实际情况适当调节。上述的缓冲液在使用前先用0.45um滤膜过滤。

Q:上样

A:样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配置；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释；如果上样体积过大，可以采取调节上样液PH和盐浓度的方式使样品的PH和电导与平衡液接近。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或0.45um滤膜过滤处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。

Q:洗涤

A:上样完毕后继续用平衡缓冲液洗至基线

Q:洗脱

A:用洗脱缓冲液洗脱（0.1M柠檬酸pH3.0；或0.1M甘氨酸pH3.0；具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关，效果不好时应进行洗脱缓冲液的优化），收集洗脱液。洗脱后，应立刻用碱性缓冲液（如1M Tris-HCl，pH9.0）将收集到的抗体溶液中和到抗体稳定的pH，避免抗体失活，维持抗体的生物活性。

Q:在位清洗

A:介质使用后，需要对介质进行在位清洗。
用0.1M NaOH清洗柱子3-5柱体积，并用5~10柱体积的纯水冲洗，然后用缓冲液吸到中性即可重复使用。如不立即重复使用，把柱子保存在20%乙醇的PBS中。

Q:如何再生

A:该重组Protein A对碱耐受，可以用0.1M NaOH洗涤再生

Q:Protein A可以重复用多少次

A:50次以上

Q:结合力不高，样本为腹水

A:1、假定是单抗腹水，建议按照以下方法处理：硫酸铵沉淀（注意调节pH为7.0，这个很重要，我们的柱子pH5就可以洗脱，无需中和，防止变性）；上柱；然后洗脱；最后100mM NaOH重生。
   2、proteinA对某些单抗亚型的亲和能力低，不如protein L，我们自己已经纯化了100多株单抗，其中30%左右的单抗proteinA不挂或者很低，但是proteinL表现很好。
建议，同步测试protieinL。

   另外，我们的proteinA是新型配基，载量测定是用人血清测试，每批次都在30mg/mL 以上，这一点，客户都可以自测，它另外具有的突出优势是：pH4.5就可以洗脱，防止蛋白变性，便于下游处理（例如50mM 醋酸钠缓冲液，pH4.5.）

Q:是否可除血清中血细胞杂质

A:可清楚血清中血细胞杂质。同时推荐样品在纯化前高速离心，去除大部分固体杂质。

Q:做小鼠载量分别是多少

A:亚型不同，鼠的载量是人载量的20%-50%左右，做小鼠建议用Protein G，这个是通用的

Q:纯化不同动物、不同亚型抗体时所用平衡缓冲液是否一样？若不一样配方？

A:不同动物、抗体亚型用的缓冲液是一样的，只是不同的动物来源、不同的抗体亚型载量会不一样。

Q:1ml大约可以提纯多少的血清？需要粗提纯吗？还是血清就可以？

A:直接血清就可以，一般人源的20mg/ml的抗体

Q:我现在有几ml鼠血清，有igg抗体，需要纯化，然后需要用纯化的igg纯化抗原，并且最后抗体、抗原需要分别保存用于后续实验，需要的是我们哪个产品

A:1、先用Protein A纯化出抗体，预计就只要1ml左右的量，估计鼠抗浓度不高，1ml就足够了。纯化出抗体后单独保存。
   2、再将抗体与Protein A结合，用一种交联试剂与抗原交联在一起得到纯化抗原。具体的交联试剂需要您再去查查

Q:除了人IgG抗体，哪些动物哪些抗体曾做过实验？载量多少？

A:除了人IgG、我们还纯化过羊、小鼠、兔子的抗体。不同的动物，不用的亚型载量有区别。