Q：贴壁细胞如何处理
A：贴壁细胞去除培养基，用PBS洗后，100µL RIPA裂解液（或其他哺乳动物细胞裂解液）中加入1~5µL全能核酸酶，室温孵育30min，收集裂解液，离心取上清即可进行下游实验。
Q：悬浮细胞如何处理
A：悬浮细胞离心收集后，在离心管中加入100µL RIPA裂解液（或其他哺乳动物细胞裂解液）加1~5µL全能核酸酶，室温孵育30min，收集裂解液，离心取上清即可进行下游实验。
Q：组织样品如何处理
A：将30~100mg动物或植物组织研磨充分后，加入100~200µL裂解液，同时加入1~5µL全能核酸酶，室温孵育30min，收集裂解液，离心取上清即可进行下游实验。
Q：大肠杆菌或其他细菌如何处理
A：细菌离心收集后，用裂解液或者研磨破碎后，每100µL加入1~5µL全能核酸酶，室温孵育30min，收集裂解液，离心取上清即可进行下游实验。
Q：如何稀释
A：正常建议稀释比例（终浓度）为1:1000~1:20000，其中时间、温度、稀释比例为影响反应的正面因素。
Q：是否用PBS稀释
A：是的
Q：能否减少用量
A：如希望减少用量，可酌情提高反应温度或延长时间
Q：反应辅助因子
A：反应液中必须补加2-5mM Mg2+
Q：反应缓冲液
A：常用生物缓冲液，如TBS、MOPS（pH6-8）等
Q：反应抑制因子
A：在含有以下物质，Omnipotent Nuclease的活性会降低50%或以上：
>150mM 一价阳离子， >100mM 磷酸盐
>100mM 硫酸铵， >100mM 盐酸胍
>0.1%SDS， >1%Triton X-100
>1%Tween 20
Q：稀释后每次用多少量，如何试梯度？起始加多少？
A：看不同的实验要求，添加量可以按照1/100-1/10000之间。真核细胞需要量比原核细胞量高，因为真核细胞中核酸含量高真核细胞起始添加量可以按照1/1000的比例添加，原核细胞可以按照1/10000的比例添加；4℃消化DNA添加量比室温消化DNA添加比例高，因为室温下Omnipotent Nuclease酶活力更高。普通CoIP实验，蛋白质表达实验可以适当稍加，对DNA残留要求高的实验，可以按照1/100的比例添加。
Q：怎样灭活Omnipotent Nuclease核酸酶？如何去除？
A：采用EDTA螯合金属离子会可逆地抑制Omnipotent Nuclease核酸酶活性，极端条件会造成不可逆失活，例如：100mM NaOH，70℃处理30min等。Omnipotent Nuclease核酸酶可采用阴离子交换柱或气相色谱法从目的产物中分离出去，由于这种核酸内切酶及其稳定，建议在终产物要求排除核酸酶的应用中不要使用Omnipotent Nuclease核酸酶。
Q：储存条件
A：保存于-20℃。储存buffer：20mM Tris-HCl pH 8.0， 50 mM NaCl， 2mM MgCl2, 50% glycerin。
Q：PH
A：建议反应体系pH值为6~8
Q：反应中需不需要加Mg2+
A：反应中Mg2+的终浓度为5~10mM
Q：Omnipotent Nuclease纯度
A：＞99%
Q：Omnipotent Nuclease作用
A：它将核酸完全消化成3-8个碱基长度的5’-单磷酸寡核苷酸。
Q：Omnipotent Nuclease特点
A：无蛋白酶、内毒素污染，没有标签，方便下游实验操作
Q：酶活单位定义
A：将在30min内，ΔA260降低1.0（相当于完全消化37µg DNA）定义为一个酶活单位，即1EU。
Q：Omnipotent Nuclease应用
A：1、蛋白提取时去除核酸污染：在重组蛋白纯化或哺乳动物细胞裂解物下游要求粘度较低的情况下，可以利用Omnipotent Nuclease核酸酶降低样品粘度以利操作；
2、有效减少存放的外周血单细胞(PBMC)的结块现象；
3、有利于不可溶性蛋白复性前，高质量包涵体制备；
4、有效去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响；
5、在非常广泛的条件下（6M urea, 0.1 M Guanidine HCl, 0.4% Triton X100, 0.1% SDS, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF）, 降解所有形式的（双链，单链，线状，环状）DNA和RNA；
6、去除蛋白质产品中的污染，符合FDA关于核酸污染去除的规程；
7、本产品可以与多种细胞细菌裂解液配合使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白质产量。
Q：Omnipotent Nuclease核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物是否兼容？
A：Omnipotent Nuclease核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物兼容，但含有EDTA的蛋白酶活性抑制剂。当EDTA浓度>1mM时，会抑制核酸酶活性，建议：如果必须加EDTA，按照2倍EDTA浓度补加Mg2+
Q：目的蛋白不溶，需要进行变性条件纯化。Omnipotent Nuclease核酸酶能在尿素环境降解核酸吗？
A：实际上，Omnipotent Nuclease核酸酶在具有尿素（6M）的情况下会增加活性。在尿素浓度为6M时，活性会先增加，再随着时间的延长活性降低。尿素浓度为7M时，Omnipotent Nuclease核酸酶会在15min后出现变性并失活。但在酶失活前，多数的核酸已被降解。如果Benzonase核酸酶的原浓度较高时，会部分补偿7M尿素的影响。
Q：产品的稳定性如何，如果不小心在室温放置几天后，酶活性会受到怎样的影响？
A：室温2-3天，对活力影响不大
Q：用全能核酸酶处理表达蛋白的粗提裂解液，来去除核酸污染，但Taq酶纯化过程中避免不了少量细菌DNA的残留
A：Taq酶纯化时，除了用Omnipotent Nuclease消化，后期还需要离子交换树脂和分子筛或者透析方法去除DNA残留
Q：反应条件
A：Omnipotent Nuclease 核酸酶的活性需要1-2mM Mg2+.而在单价阳离子浓度>50%，磷酸浓度>20mM，硫酸铵浓度>25mM等情况下，Omnipotent Nuclease 的活性会降低50%
Q：Omnipotent Nuclease 核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物可以兼容吗
A：Omnipotent Nuclease 核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物是可以兼容，但是对于含有EDTA配方的蛋白酶抑制剂混合物要特别小心，EDTA浓度大于1mM时会抑制Omnipotent Nuclease 的活性。
Q：Omnipotent Nuclease与超声的作用区别
A：超声的确可以破碎细胞或者组织，但是和Omnipotent Nuclease有不同之处！
1.Omnipotent Nuclease可以将DNA和RNA消化成3-8个碱基的单磷核苷酸，而超声只能打碎为大片段，所以处理完样品很多还是很粘稠，不易吸取上样；所以在COIP实验时，加入Omnipotent Nuclease可以降低背景。
2.如果目的蛋白被核酸包裹，只能使用Omnipotent Nuclease将核酸消化，才能将蛋白释放；
3.超声就是在冰上操作，也会产热，易降解热敏感的蛋白；Omnipotent Nuclease可以在低温下消化，不会降解目的蛋白。
Q：哪些实验可能用得到Omnipotent Nuclease，在哪一步骤加Omnipotent Nuclease
A：例如：his蛋白纯化，IP实验。细胞裂解时
Q:样本黏度高，不易过柱
A:细胞破碎后由于含有大量DNA和RNA，黏度很高，过柱不容易。解决的方法有两种：1是用核酸酶。2也可以用高压匀浆。都可以达到降低黏度的作用。
差别在于：用核酸酶，DNA和RNA可以绛解成小片段或单核苷酸；高压匀浆用机械剪切力将DNA和RNA处理成较大的片断。
超声波处理在处理小量表达的时候问题不大，但做大量蛋白表达的时候有困难。
核酸酶的另外一个重要应用是：若你的目的蛋白是DNA结合蛋白，那么纯化的时候最好先用核酸酶处理。
Q:我的目的蛋白不溶，需要进行变性条件纯化。Omnipotent Nuclease核酸酶能在尿素环境消化核酸吗？
A:实际上Omnipotent Nuclease核酸酶在有尿素（浓度可达6M）的情况下会增加活性。在尿素浓度为6M时活性先增加，随着时间延长活性又有降低。尿素为7M时，Omnipotent Nuclease核酸酶15分钟后出现变性并失活。但是在酶失活前多数核酸已经降解了。如果Omnipotent Nuclease核酸酶的原浓度较高时会部分补偿7M尿素的影响。
Q:说明书中建议100ul添加1-5ul 全能核酸酶Omnipotent Nuclease，而最下面的tips中又建议1:1000-20000稀释，那么上一句1-5ul是指稀释前的量还是稀释后？
A:说明书上的三个例子都是从上游实验开始 就使用全能核酸酶 其核酸残留较多，所以需要用量较多
如果从下游实验开始 其中核酸残留本身已经比较少 则需要的全能核酸酶的用量 按照1:1000--1:20000的比例添加即可------这也是一般工业级的使用方法
科研实验的话 建议按照说明书上面的建议 进行操作 效果更佳
Q：我的样本大概是100mL菌液，推荐买多少Omnipotent Nuclease核酸酶？
A：需要根据重悬菌体所需裂解液的体积来确定需要酶的量。若普通蛋白纯化，则需要浓度为25U/mL；核蛋白则需要100U/mL；病毒表达蛋白纯化需要浓度为12.5U/mL；疫苗产品需要量为0.9~1.1U/mL。
