Q:适用实验

A:可以广泛用于ELISA、Western Blotting、免疫组化等实验，用以特异性检测6*His标签。

Q:NTA-HRP是不是就是his标签抗体

A:是的，区别在于它相当于His-HRP，无需二抗，一步完成。

Q:浓度

A:1mg/ml，含50%甘油（PBS）

Q:推荐Western Blot稀释比例

A:1:100-2000稀释

Q:推荐Elisa稀释比例

A:1:1000-10000稀释

Q:推荐免疫组化稀释比例

A:1:100-2000稀释

Q:封闭液

A:封闭液应该选用1%BSA/TBST缓冲液，避免用牛奶

Q:缓冲液成分

A:应该避免EDTA、咪唑或者其他二价金属离子

Q:需去除膜上的NTA-HRP

A:在WB实验中，如果需要去除膜上的NTA-HRP，只需要把浸入100mM咪唑，震荡洗涤30min，然后用缓冲液洗涤即可。

Q:为什么要避免EDTA

A:避免和EDTA等金属螯合剂共同使用，这类试剂会螯合Ni-NTA中的镍离子，影响NTA和6*His的结合

Q:缓冲液是否可含咪唑

A:咪唑同样会和镍离子结合，缓冲液中含有咪唑会影响NTA和6*His的结合

Q:信号没有或者太弱

A:1、6*His没有充分暴露，WB可以在转膜后用巯基乙醇和6M尿素处理膜，然后在加NTA-HRP，Elisa可以在包板前，先对蛋白加入巯基乙醇后加热处理；

   2、目标蛋白或者NTA-HRP量太少，应增加用量，延长反应和曝光时间

Q:背景太高

A:1、封闭不彻底；

   2、目标蛋白或者NTA-HRP量太多

Q:杂带

A:1、WB高分子量杂带，处理样品不彻底，应该加入DTT并煮沸处理；

   2、目标降解产生低分子量杂带