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Benzonase Nuclease 全能核酸酶

2017-06-22

                  ---------核酸克星,DNA消消消!RNA消消消!




在CO-IP、蛋白提取或纯化实验中,很多时候,您的样本都有不同程度的核酸污染,不注意便会出现各种各样的问题,如跑胶后背景高、蛋白样本粘度高、蛋白产量低等。


今天,我们为您推荐Benzonase Nuclease 全能核酸酶----适用于去除蛋白质产品中的核酸污染、降低黏度、提高产量,它比超声更彻底!比DNase/RNase酶更霸道!妥妥的为您排忧解难!

 


应用:


◆       蛋白提取时去除核酸污染:在重组蛋白纯化或哺乳动物细胞裂解物下游要求粘度较低的情况下,可以利用Benzonase核酸酶降低样品粘度以利操作,提高蛋白质产量;

◆       有效减少存放的外周血单细胞(PBMC)的结块现象;

◆       有利于不可溶性蛋白复性前,高质量包涵体制备;

◆       有效去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响;

◆       可以用于蛋白抽提、蛋白纯化、Western Blot、免疫沉淀等实验。


简介:

全能核酸酶Benzonase Nuclease是来源于Serratia Marcescens 经过基因工程改造的核酸酶。

它能够在非常广泛的条件下(6M urea, 0.1 M Guanidine HCl, 0.4% Triton X100, 0.1% SDS, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF), 降解所有形式的(双链,单链,线状,环状)DNA和RNA。其活力比DNaseI强34倍,能以相同的效率酶切单链和双链DNA和RNA,将核酸完全消化成3-8个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸。

全能核酸酶适用于去除蛋白质产品中的污染,符合FDA关于核酸污染去除的规程。


特点:

★Benzonase可以与多种细胞细菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸,降低溶液粘性,提高蛋白质产量;

★本公司全能核酸酶经特殊工艺表达纯化,无蛋白酶、内毒素污染,没有标签,方便下游实验操作;

★在IP实验中,在使用Protein A+G Sepharose Beads的同时,加入benzonase对去除核酸污染效果更佳;

★纯度>99%;

★活性远高于进口品牌产品。

 

(使用benzonase后,蛋白粘度明显降低)


优势:

去除核酸的方式也有很多,如:超声法、DNase/RNase酶法,全能核酸酶相比这两种最常用的方法到底有什么区别呢?




超声法

DNase/RNase酶法

Benzonase全能核酸酶

相似处

可以破碎细胞或者组织

DNase酶消化DNA

RNase酶消化RNA

Benzonase可以消化所有DNA和RNA

优势

利用剪切力可在一定程度上降解核酸

利用核酸内切酶活性,可在温和条件下,较好的消化核酸

一种酶即可降解所有形式的DNA和RNA,将DNA和RNA消化成3-8个碱基的单磷核苷酸;

可降低蛋白粘性、降低背景、提高蛋白产量;

目的蛋白被核酸包裹,只能使用benzonase将核酸消化,才能将蛋白释放;

benzonase可以在低温下消化,不会降解目的蛋白;

极高的稳定性,可以与多种细胞细菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸。

缺陷

1、 超声只能打碎为大片段;

2、 处理完样品很多还是很粘稠,不易吸取上样;

3、 若目的蛋白被核酸包裹,无法使用超声方法;

4、 即使在冰上操作,也会产热,易降解热敏感的蛋白;

5、 机械操作随机性强,难评估核酸清除的有效性。

特定酶消化特定核酸,操作繁琐、重复性差

亲,还没发现呢^_^~^_^


实验图片:



价格:

货号

规格

包装规格

市场指导价(元)



RPE002-50

25KU

50ul

625


RPE002-200

100KU

200ul

2000


RPE002-1000

500KU

1000ul

7500




其他品牌价格对比:

品牌

规格

价格

七海生物

25KU(500U/ul)

625元

Sigma

5KU(≥250 U/μL)

643.5元

Merck

10KU(25-29 U/ul)

1670元



常见问题:


Q:组织样品如何处理

A:将30~100mg动物或植物组织研磨充分后,加入100~200µL裂解液,同时加入1~5µL全能核酸酶,室温孵育30min,收集裂解液,离心取上清即可进行下游实验。


Q:大肠杆菌或其他细菌如何处理

A:细菌离心收集后,用裂解液或者研磨破碎后,每100µL加入1~5µL全能核酸酶,室温孵育30min,收集裂解液,离心取上清即可进行下游实验。


Q:如何稀释

A:正常建议稀释比例(终浓度)为1:1000~1:20000,其中时间、温度、稀释比例为影响反应的正面因素。


Q:稀释后每次用多少量,如何试梯度?起始加多少?

A:看不同的实验要求,添加量可以按照1:100-1:10000之间。真核细胞需要量比原核细胞量高,因为真核细胞中核酸含量高真核细胞起始添加量可以按照1:1000的比例添加,原核细胞可以按照1:10000的比例添加;4℃消化DNA添加量比室温消化DNA添加比例高,因为室温下Benzonase酶活力更高。普通Co-IP实验,蛋白质表达实验可以适当稍加,对DNA残留要求高的实验,可以按照1:100的比例添加。


Q:反应缓冲液

A:常用生物缓冲液,如TBS、MOPS(pH6-8)等。


Q:怎样灭活Benzonase核酸酶?如何去除?

A:采用EDTA螯合金属离子会可逆地抑制Benzonase核酸酶活性,极端条件会造成不可逆失活,例如:100mM NaOH,70℃处理30min等。Benzonase核酸酶可采用阴离子交换柱或气相色谱法从目的产物中分离出去,由于这种核酸内切酶及其稳定,建议在终产物要求排除核酸酶的应用中不要使用Benzonase核酸酶。


Q:Benzonase 核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物可以兼容吗

A:Benzonase 核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物是可以兼容,但是对于含有EDTA配方的蛋白酶抑制剂混合物要特别小心,EDTA浓度大于1mM时会抑制Benzonase 的活性。



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