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TEV protease

Q:来源

A:烟草蚀纹病毒蛋白酶;Tobacco etch virus protease,来源于烟草蚀纹病毒(TEV)Nla的重组蛋白酶,大肠杆菌重组表达。


Q:TEV protease用途

A:可以用来切除纯化后融合蛋白的亲和标签


Q:识别位点

A:TEV蛋白酶具有很强的位点特异性,能够识别EXXYXQ(G/S)的七氨基酸序列(Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly),最普通的是ENLYFQG,其切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸或丝氨酸之间。


Q:如何去除

A:该酶带有His-sumo Tag经6*His标签纯化,剪切反应完毕后可通过Ni-NTA(产品货号:PAN001)去除。


Q:酶活性单位定义

A:在1*TEV Buffer(50mM Tris-HCL,PH 8.0,0.5mM MEDTA,1mM DTT)中,30℃条件下反应1小时,能够切割3ug的反应底物达85%以上所需的酶量定义为一个活性单位。


Q:溶液组分

A: 

TEV protease储存液 10*cleavage Buffer
25mM Tris-HCL,PH8.0 500mM Tris-HCL,PH8.0
150mM NaCL 5mM EDTA
1mM EDTA 10mM DTT

Q:推荐反应体系

A:

反应物组成 体积
融合蛋白 50ug
TEV protease 2ul(10U/ul)
10*TEV Buffer 10ul
ddH2O 至100ul

Q:活性测试

A:待测融合蛋白100ug,加入TEV protease 2ul,4℃反应16小时,取酶切前后样品SDS-PAGE检测,>90%融合蛋白被切割。


Q:酶纯度

A:>90%

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