Q:反应原理

A:基因组DNA双链变性解链后，在亚硫酸盐的作用下序列中的C→U，CG→UG，而5-甲基胞嘧啶则不受影响，CG→CG。通过各种实验技术，如MSP（Methylation Specific PCR），BSP（bisulfate-sequencing PCR），HRM（High Resolution Melting），焦磷酸测序（Pyrosequencing）和甲基化芯片等技术，可检测出这种差异，从而确定基因组CpG岛甲基化状态。

Q:修饰时间是多久

A:本制品可将DNA变性的同时进行亚硫酸氢盐转化操作，整个操作过程的时间被缩短到3小时。

Q:可以转换多少DNA

A:试剂盒每次转换反应可以转换1ng-1ug的DNA

Q:推荐DNA量

A:为了达到最优的转换效果，最好是限制在0.2ug-0.8ug的范围，能将所有非甲基化胞嘧啶转换成尿嘧啶，推荐使用500ng的DNA。

Q:转换率

A:＞99.9%

Q:MC1 MIX（M-Conversion Reagent）制备

A:试剂盒中所提供的MC1 MIX是固体混合物，并且一定要在首次使用前制备好。方法：添加900ul ddH2O或者去离子水，300ul的MC2 Buffer和100ul的MC3 Buffer到一管MC1中。在室温下颠倒混匀2分钟或在摇床上摇动溶解5分钟。

Q:MC1溶液的保存

A:在使用之前将MC1溶液在室温（20℃-30℃）下避光保存。每管的MC1是针对10次DNA处理设计的。为了得到较好的结果，MC1应当在制备后立即使用。如果不立刻使用的话，MC1溶液可以在-20℃存储1周。而且在使用之前存储的MC1溶液一定要在室温下解冻并且通过振荡或颠倒混匀2分钟。MC1对光很敏感，所以要尽量减少在光下的暴露。

Q:M-WASH BUFFER的制备

A:添加22ml（对于100次的应为44ml）95%或无水乙醇到M-WASH BUFFER中来制备最终可以使用的M-WASH BUFFER

Q:最佳修饰量

A:推荐最佳修饰量为400-800ng

Q:每次加入的MC1溶液量

A:PCR管中添加150ul的MC1（M-Conversion Reagent）到每20ul DNA样品中。

Q:DNA样品量不足20ul

A:如果DNA样品的体积小于20ul，则用水来弥补差量。

Q:样品管暂时不实验，是否可以保存

A:4℃下存储（最多20小时）。

Q:洗脱后的DNA如何保存

A:DNA可立刻进行分析或储存在低于-20℃下以备以后使用。

Q:PCR每次使用多少洗脱的DNA作为模板

A:我们建议您每次PCR（25ul体系）使用4ul洗脱的DNA作为模板。